¬ŅC√≥mo funciona la PCR (Reacci√≥n en cadena de la polimerasa)?

En este artículo veremos cómo funciona la PCR, la prueba más utilizada para detectar el coronavirus (SARS-CoV-2). Este virus se ha convertido en la mayor pandemia del siglo XXI y lo mejor para combatirlo es estar informado y conocerlo adecuadamente.

DEFINICI√ďN DE PCR

La reacci√≥n en cadena de la polimerasa (PCR) por sus siglas en ingl√©s ‚Äúpolymerase chain reaction‚ÄĚ consiste en obtener hasta 109 copias de un ADN en muy poco tiempo.

COMPONENTES DE LA REACCI√ďN

Para que se lleve a cabo esta reacción necesitamos:

  • Un ADN molde
  • Un par de cebadores de ADN. Los cebadores son peque√Īas secuencias de oligonucle√≥tidos que se pegar√°n al ADN molde y servir√°n de gu√≠a para que la ADN polimerasa comience a replicar el molde.
  • La ADN polimerasa termoestable Taq (derivada de la bacteria term√≥fila Thermus aquaticus, que crece naturalmente en aguas termales a una temperatura de 90¬ļC, por lo que no se desnaturaliza a las altas temperaturas).
  • Los 4 nucle√≥tidos
  • Buffer (tamp√≥n) que contiene iones magnesio y aporta las condiciones ideales para la reacci√≥n.

PASOS DE LA REACCI√ďN PCR

  1. Desnaturalizaci√≥n del ADN a 95¬įC
  2. Anillamiento. Es el momento en el que el cebador se une al ADN molde
  3. Extensión. La polimerasa comienza a copiar las cadenas.

Esto se repite unas 30-40 veces, y cuando han acabado estos ciclos se deja el tiempo que consideremos necesario a 4-10 ¬įC hasta que saquemos las muestras de la m√°quina. En los primeros ciclos de PCR se amplifican regiones de ADN de mayor tama√Īo que el que nos interesa, pero cuando se comienzan a copiar las nuevas cadenas se acortan y son del tama√Īo que esperamos. Los fragmentos m√°s grandes son irrelevantes en la carga del gel ya que son muy pocos en comparaci√≥n con las secuencias del tama√Īo esperado.

Pasos de la PCR. Imagen propiedad de: Thermofisher

TIPOS DE PCR

  • PCR m√ļltiplex. Se usa para amplificar varias secuencias de ADN diferentes simult√°neamente.
  • PCR nested (anidada). Est√° destinada a reducir la contaminaci√≥n de los productos debido a la amplificaci√≥n inespec√≠fica, es decir, ADN que no est√° en buenas condiciones, como el que se puede extraer de una momia egipcia de hace unos 3.000 a√Īos.
  • Ensamblaje de PCRs, consiste en la s√≠ntesis de fragmentos largos de ADN mediante la realizaci√≥n de una PCR en la que los cebadores se superponen y una segunda PCR que une todos los fragmentos.

APLICACIONES:

  • Detecci√≥n de pat√≥genos como el SARS-CoV-2
  • Generar delecciones en serie para hacer versiones truncadas de una prote√≠na
  • Adici√≥n de sitios de restricci√≥n
  • Marcado por PCR de una sonda oligonucleot√≠dica
  • An√°lisis de expresi√≥n g√©nica mediante PCR por transcripci√≥n inversa (RT-PCR)

Ahora que entiendes cómo funciona la PCR quizás te convenga aprender algo sobre los virus y las pandemias. Nosotros recomendamos este libro del microbiólogo Ignacio López.

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Carmen Medina Rabasco

Bi√≥loga, bloguera y so√Īadora.

6 pensamientos sobre “¬ŅC√≥mo funciona la PCR (Reacci√≥n en cadena de la polimerasa)?”

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